www.neurologiepropraxi.cz / Neurol. praxi. 2024;25(4):282-286 / NEUROLOGIE PRO PRAXI 283 HLAVNÍ TÉMA Současné standardy molekulárně‑patologického testování nádorů centrálního nervového systému zhodnocení tkáně s imunohistochemickým průkazem molekul ozřejmující histogenezi (např. GFAP jako marker astrocytární diferenciace). Metodu nepřímé imunohistochemie lze využít nejen k detekci dalších důležitých markerů (proliferační index měřený Ki-67, exprese proteinu p53 a podobně), ale i ke stanovení expresního statutu specifického mutovaného proteinu, např. standardizovaná protilátka k detekci mutovaného proteinu IDH1 (izocitrátdehydrogenáza 1) R132H (Anti‑Human IDH1 R132H Myší monoklonální protilátka klon H09 (Obr. 1). Výhodou imunohistochemického průkazu je rychlost vyšetření, lokalizace proteinu a cenová/ přístrojová nenáročnost. Na základě indikace patologa/onkologa probíhá následně molekulárně‑patologické vyšetření, které se liší dle změny, kterou je zapotřebí prokázat, a detekčním limitem jednotlivých metod. Lze využít molekulární vyšetření na úrovni DNA, RNA, případně metylace DNA. Strategie molekulárního testování: analýza genů IDH: IDH1/IDH2 (geny pro izocitrátdehydrogenázu), u IDH mutovaných gliomů analýza kodelece 1p/19q, u IDH mutovaných bez kodelece mutační analýza v genu ATRX, společně s posouzením mutace v genu TP53, u IDH mutovaných astrocytomů analýza homozygotní delece CDKN2A/ CDKN2B, u glioblastomů bez mutace v IDH vyšetření metylace promotoru MGMT, vyšetření mutace promotoru genu TERT (oligodendrogliomy a glioblastomy bez mutace v IDH), difuzní gliomy bez IDH mutace grade 2–3, vyšetření zisku chromozomu 7 a ztráty chromozomu 10 (+7/-10), amplifikace genu EGFR a mutace promotoru TERT (určení diagnózy IDHWT GBM, WHO grade 4), vyšetření mutace histonu H3F3A p. K27 u středočarových gliomů, testování mutace histonu H3F3A p. G34, genu MYBL1, genu FGFR1 u dětí a mladých dospělých pacientů bez mutace v genu IDH, testování mutace v genu BRAF (cílená terapie), průkaz fúzí specifických pro daný subtyp CNS tumoru: ZFTA:C11orf95, KIAA1549:BRAF atd. (upraveno dle: KDP [online]. Praha: ÚZIS ČR, 2020 [cit. 2023-12-21]. Dostupné z: https:// kdp.uzis.cz). Více se strategii molekulárního testování nádorů CNS věnuje další článek tohoto čísla (Švajdler et al., 2024). Před každým molekulárním vyšetřením je nutné určit procentuální zastoupení nádorových buněk ve vzorku biopsie, kterou provede patolog. Úzká spolupráce mezi laboratoří (molekulárním biologem/genetikem) a vyšetřujícím patologem je stěžejní pro správnou indikaci vyšetření, výběr optimální tkáně a molekulární metodiky. Bez této úzké spolupráce může docházet ke zcela zavádějícím výsledkům (vyšetřování nenádorové tkáně či metastáz extrakraniálních nádorů v mozkové tkáni), které v konečném důsledku můžou vést k závažnému poškození pacienta. Dle 5. revize nádorů CNS je rovněž jedním z indikačních kritérií podrobnějšího molekulárně ‑patologického vyšetřování věk pacienta. Sice je arbitrárně stanoven věk 55 let, ale nejde jen o absolutní číslo, vždy je třeba vzít v úvahu biologický stav nemocného, jeho klinický stav a perspektivu. Z toho plyne úzká spolupráce s ošetřujícím neuroonkologem v rámci neuroonkologického multidisciplinárního týmu. V případě detekce velkých delecí, kodelecí, amplifikací (celých genů, případně oblastí na chromozomu) využíváme fluorescenční in situ hybridizaci na interfázních jádrech (I‑FISH), kdy vyšetřujeme přímo DNA v jádře Obr. 1. Imunohistochemická detekce proteinu IDH1 R132H Negativita (A) imunohistochemického průkazu IDH1 R132H u glioblastomu. Pozitivní (B) imunohistochemický průkaz IDH1 R132H u IDH mutovaného glioblastomu. Původní zvětšení 200× Obr. 2. Mutačně specifické PCR, detekce mutace v genu BRAF p.V600E Na obrázku je zobrazen výsledek mutačně specifického PCR pro detekci mutace v genu BRAF, p.V600E (NM_004333.6: c.1799T>A). PCR produkty jsou detekovány pomocí čipové elektroforézy na přístroji 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara). Pro každý vzorek probíhají dvě reakce. Vzorky 1–4 jsou amplifikovány s primery BRAF bez mutace (wild type: wt), slouží jako kontrola amplifikace a kontrola přítomnosti wtBRAF. Vzorek 1: pacient, vzorek 2: pozitivní kontrola BRAF p.V600E, vzorek 3: wt BRAF kontrola, vzorek 4: negativní kontrola (voda). Vzorky 5–8 jsou amplifikovány s mutačně specifickými primery pro mutaci p.V600E. Vzorek 5: pacient – amplifikace s mutačně specifickým primerem znamená přítomnost dané mutace, vzorek 6: pozitivní kontrola mutační, vzorek 7: kontrola wt, vzorek 8: negativní kontrola (voda)
RkJQdWJsaXNoZXIy NDA4Mjc=